一、范围本规范适用于硅胶基质（C18、PSA、氨基、氰基、硅胶、混合型填料）、高分子聚合物基质（HLB、WAX、WCX）各类常规固相萃取小柱，涵盖仓储保存、实验前标准预处理、使用后再生清洗、重复复用判定全流程操作要求，可作为实验室样品前处理 SOP、耗材管控、成本优化技术依据。
二、术语与基础说明
预处理（活化平衡）：通过有机溶剂、水溶液依次浸润填料，恢复吸附位点活性，建立与样品匹配的亲水 / 疏水环境，防止目标物吸附损失。
再生复用：单次使用后通过梯度溶剂冲洗去除基质杂质、残留目标物，恢复填料吸附性能，实现多次重复使用。
穿透容量：小柱可稳定吸附目标物的最大样品量，再生多次后穿透容量下降至标准下限则报废。
基质残留：样品色素、油脂、蛋白、腐殖酸等杂质不可逆吸附在填料孔隙，造成回收率降低、基线抬升、交叉污染。
三、固相萃取小柱标准化保存规范
3.1 未开封全新小柱仓储保存
环境条件
存储环境温度 5～30℃，相对湿度 40%～70%；避光、通风，远离有机溶剂挥发、酸碱试剂、臭氧环境。
分类存放要求
硅胶键合相小柱（C18、氨基、氰基）：严禁长期高湿存放，避免硅羟基水解、填料键合相脱落；开封前原铝箔袋密封保存。
聚合物 HLB、离子交换柱（WAX/WCX）：耐潮湿，但不可直接接触水汽、冷凝水，整盒密封存放。
正相填料（硅胶、氧化铝、佛罗里硅土）：严格干燥保存，受潮会大幅降低吸附选择性，开封后尽快用完。
堆放禁忌
禁止重压堆叠，防止筛板变形、填料压实堵塞；避免与强酸、氧化剂同柜存放。
3.2 开封未使用完小柱短期保存（1～7 天）
两端密封：小柱上下两端配套堵头密封，放入原装密封袋，加入干燥剂。
反相类（C18、HLB）：柱内保留少量甲醇 / 乙腈润湿填料，防止填料干死失活；
正相类（硅胶、Florisil）：排空柱内溶剂，干燥密封，防止吸水失活；
离子交换柱：留存对应缓冲盐平衡液密封，避免电荷位点失效。
3.3 长期闲置保存（7 天以上）
反相小柱：甲醇冲洗后，低速抽干至微润湿状态，两端密封冷藏（4℃）；
正相填料：纯氮气吹干填料，干燥器内避光保存；
离子交换固相萃取柱：水洗→甲醇脱水，干燥密封冷藏；
禁止冷冻保存，低温会造成填料孔隙结构不可逆损伤。
3.4 已上样使用中途暂停保存（样品吸附状态）
目标物保留在填料上，不可完全抽干；
加入少量弱淋洗溶剂浸润填料，两端密封，4℃冷藏，静置时长不超过 24h；
油脂、高色素样品不可静置过夜，杂质会发生不可逆吸附。
四、不同类型 SPE 小柱标准化预处理（活化平衡）操作流程
4.1 反相固相萃取小柱（C18、C8、HLB）通用预处理
适用：水体、食品中弱极性、非极性有机物（农残、多环芳烃、油脂）
活化：甲醇 / 乙腈 3～5 倍柱体积，低速过柱，浸润全部填料；
平衡：纯水或样品初始缓冲液 5 倍柱体积，置换有机相；
禁止活化后抽干填料，填料干燥会造成疏水吸附位点塌陷，目标物回收率暴跌。
4.2 正相固相萃取小柱（硅胶、Florisil、氨基、氰基）预处理
适用：油脂、植物油、脂溶性维生素、极性杂质分离
活化：二氯甲烷 / 乙酸乙酯 5 倍柱体积；
平衡：与样品溶剂极性匹配的正相溶剂（正己烷、石油醚）；
全程保持干燥，严禁水相进入填料，吸水会直接丧失分离能力。
4.3 混合型离子交换小柱（WAX/WCX/MCX/MAX）预处理
适用：水体、生物样品中酸碱类极性化合物、兽药、有机酸
活化：甲醇 4 倍柱体积；
平衡：对应 pH 缓冲溶液 5 倍柱体积，调节填料电荷环境；
上样前保证柱内无气泡，气泡会造成局部通路、富集不均。
4.4 预处理通用质控要点
溶剂流速控制：1～2 滴 /s，保证溶剂与填料充分接触；
柱内无干层、无气泡，出现干柱需重新完整活化；
活化、平衡溶剂纯度≥色谱纯，减少柱内杂质本底；
批量处理小柱时，同一批次统一溶剂、统一流速，保证平行性。
五、固相萃取小柱分级再生复用操作技术
5.1 适用与禁用复用场景
可再生复用小柱
仅适用于色素、油脂较少的水样、清洁饮料、地表水等低基质干扰样品；C18、HLB、硅胶、离子交换柱均可有限次再生。
不可再生、单次报废场景
高腐殖质污水、污泥、肉制品、中药提取液等高色素、高油脂样品；
重金属、强氧化剂、高浓度酸碱样品污染后的小柱；
筛板变形、填料开裂、出现明显穿透、回收率下降超 20% 的小柱。
5.2 一级轻度再生（常规水样、低杂质样品，可重复 3～5 次）
适用于仅吸附少量目标物，无明显色素残留的小柱
洗脱后，甲醇 5 倍柱体积冲洗，洗脱残留待测物；
超纯水 5 倍柱体积冲洗去除水溶性盐类；
氮气微吹干，按全新小柱预处理流程活化平衡，直接复用。
5.3 二级深度再生（轻微发黄、少量油脂残留，最多复用 2～3 次）
梯度冲洗顺序（全程慢速过柱）：
乙腈 / 甲醇（1:1）5 倍柱体积，洗脱有机残留；
50% 甲醇水溶液冲洗去除水溶性杂质；
稀硝酸（0.05mol/L）过柱（硅胶 / 离子交换柱专用，HLB 可跳过），去除金属离子吸附；
纯水冲洗至中性；
甲醇脱水，微湿密封保存或直接活化复用。
5.4 三级强再生（仅聚合物 HLB 柱专用，硅胶柱禁止使用）
针对轻微色素吸附，硅胶基质经强有机溶剂处理易出现键合相流失：
甲醇→丙酮→甲醇梯度冲洗；
纯水充分置换有机相；
常温避光平衡后使用；
仅建议复用 1 次，再生后必须做回收率验证。
5.5 正相填料专用再生流程（Florisil、硅胶）
正己烷冲洗去除脂类；
二氯甲烷冲洗极性杂质；
氮气吹干，干燥密封保存。
六、再生后复用性能判定标准（达到以下方可重复使用）
外观判定：填料无发黑、无大面积黄 / 绿色色素堆积，筛板无堵塞；
流速判定：同等负压下流速与新柱偏差≤15%，无持续堵塞；
回收率验证：标准品加标回收与新柱差值≤10%；
基线空白判定：空白溶剂过柱后色谱无明显鬼峰、杂质峰；
最大复用次数限值
HLB 聚合物柱：≤5 次；
C18 硅胶反相柱：≤3 次；
离子交换柱：≤2 次；
Florisil / 硅胶正相柱：≤2 次。
超出次数统一报废，防止交叉污染。
七、操作禁忌与故障防控
硅胶基质小柱禁止高浓度强酸长时间浸泡，会破坏硅烷键合相；
再生冲洗严禁高速抽干填料，填料干裂将降低吸附容量；
高色素样品小柱不建议再生，色素不可逆吸附会持续造成交叉污染；
再生溶剂需依次由强到弱过渡，避免溶剂相分离产生气泡；
再生后的小柱单独存放、标记使用次数，不可与全新小柱混用。
八、记录与管控要求
每根可复用小柱标注使用次数、再生日期、处理样品基质；
建立耗材再生台账，记录再生溶剂、再生等级、回收率验证结果；
再生后不达标的小柱统一收集，按实验室危废规范处理；
定期对比新柱与再生柱平行样品数据，评估复用可行性。
九、总结
固相萃取小柱的使用寿命、检测稳定性直接由保存方式、预处理标准化程度、再生工艺决定。
日常实验中，清洁基质样品可通过规范分级再生实现多次复用，有效降低耗材成本；高杂质、高色素基质样品建议一次性使用，规避交叉污染风险。
严格执行本规范的仓储密封、梯度活化、分级再生、复用验证流程，既能保证样品前处理回收率与数据平行性，又可实现耗材精细化管控。
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